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異槲皮苷含量檢測方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-07-26 | 250 次瀏覽 | 分享到:

異槲皮苷又稱羅布麻甲素,槲皮素-3-O-葡萄糖苷,屬于黃酮類化合物。主要存在于砂仁、桑葉、羅布麻、田基黃、辣木葉、鬼針草、青錢柳葉等多種藥用植物中,異槲皮苷具有許多的藥理作用,比如鎮(zhèn)靜、降血壓等。異槲皮苷具有活性氧自由基和抗氧化作用,活性氧自由基在生物體內(nèi)參與氧代謝,具有很高的反應(yīng)活性,能清除體內(nèi)多余的自由基。



檢測樣品中異槲皮苷含量,常用的方法包括高效液相色譜(HPLC)法。這是一種高靈敏度的方法,它重現(xiàn)性好,穩(wěn)定性強,檢測效率高,色譜分析準確。下面呢,我們就稍微提一下HPLC檢測方法。


準備:這里需要確認的是HPLC的設(shè)備和系統(tǒng)運行,配備必要的色譜柱,比如C18的柱子,紫外檢測器。對于流動相,要選擇對應(yīng)純度的試劑,比如甲醇、乙腈等。異槲皮素對照品肯定是需要的,在做標準曲線的時候,需要對標準品進行梯度稀釋,并進樣檢測色譜峰,通過峰面積對濃度進行對照,制作標準曲線,計算回歸方程。



樣品處理:精密稱量適當(dāng)重量的異槲皮素樣品和對照品,用50%甲醇分別制成20ug/mL的溶液。


色譜條件:準備了以上的設(shè)備和溶劑,就要進行最優(yōu)化的設(shè)計組合。也就是將色譜柱、流動相、流速、柱溫、檢測波長、進樣量等參數(shù),組合起來能夠達到最佳的色譜分析效果的條件。比如,A-0.1%甲酸水與B-乙腈的混合液,通過梯度洗脫或等度洗脫方式進行;流速1ml/min,柱溫30℃,紫外波長354nm,進樣量20ul。


檢測和分析:


在設(shè)定的色譜條件下,異槲皮素和其他化合物在色譜柱上得到分離,并在流動相作用下洗脫出來,通過檢測器獲取信號,模擬成色譜圖和數(shù)據(jù)。根據(jù)色譜圖上的峰面積或峰高,結(jié)合對照品的濃度,也就是回收率,可以計算出樣品中的異槲皮素含量。


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