咖啡酸是一種有機酸，還是一種天然的酚類化合物，又名3,4-二羥基肉桂酸，可溶于熱水、乙醇、具有廣泛的抑菌、抗病毒、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫等作用。咖啡酸一般存在于黃花、蒲公英、升麻等中草藥植物中，檢測植物樣本中的咖啡酸含量，對科學研究具有重要的意義。

檢測咖啡酸含量的方法有高效液相色譜（HPLC）法、毛細管電泳法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法等。這里，著重說一點HPLC檢測方法。

HPLC比較適合植物提取物含量檢測，比如咖啡酸等。化合物在色譜柱的分配系數(shù)不同，可以將樣品中的各組分進行分離，通過流動相逐步洗脫出來，并在檢測器中測定含量。根據(jù)在軟件中記錄的色譜圖數(shù)據(jù)，包括峰高和峰面積，對標準品進行梯度進樣，對色譜峰面積，制作標準曲線，計算回歸方程和回收率。對樣品進行測定，并根據(jù)標準曲線，計算樣品中的咖啡酸含量。

檢測步驟包括：樣品制備-色譜條件設置-進樣測定-數(shù)據(jù)分析。其中，樣品制備是基礎的，將含有咖啡酸的樣本進行提取、純化等，得到適合HPLC檢測的溶液。對色譜條件的選擇，是非常關(guān)鍵的，它也是檢測的方法。將色譜系統(tǒng)的各個參數(shù)，通過最優(yōu)化組合設計，獲取最佳的匹配結(jié)果。比如，選擇C18的色譜柱，甲醇-磷酸鹽緩沖液為流動相，紫外檢測器（323nm波長），進樣量、流速和柱溫等。對標準品進行梯度進樣，進樣得到色譜峰，制作標準曲線。在同樣的條件下，對樣品進行測定，并記錄色譜峰數(shù)據(jù)，計算結(jié)果。

在這個過程中，會用到不少的設備。比如，臺式離心機，超聲波清洗機，烘箱，移液器，過濾器，濾膜，注射器，進樣瓶等。實驗過程中細微的地方，都可能影響到色譜峰的變化。很多朋友在檢測的時候，發(fā)現(xiàn)色譜峰不對勁，就去找什么原因。其實，大多數(shù)的原因就在于基礎的操作和細微的錯誤。HPLC能夠檢測多種化合物，特別是復雜的樣品分析。具有分離效果好，檢測靈敏度高，重復性好的特點。