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脯氨酸是一種環(huán)形的亞氨基酸,化學(xué)式為C5H9NO2,分子量為115.13,等電點(diǎn)為6.30,易溶于水。當(dāng)脯氨酸進(jìn)入肽鏈,就會(huì)形成4-羥脯氨酸,是動(dòng)物膠原蛋白的重要成分。當(dāng)植物在干旱、高溫、低溫、鹽堿等逆境條件下,羥脯氨酸含量會(huì)明顯提升,說(shuō)明脯氨酸和植物逆境的適應(yīng)性有關(guān)。這也是檢測(cè)脯氨酸的重要意義,可以判斷植物的生長(zhǎng)規(guī)律和適應(yīng)性。另外,脯氨酸是人體的非必需氨基酸。上面我們首先提到的物理和化學(xué)特性,是很有必要的。在檢測(cè)脯氨酸含量的時(shí)候,就是要利用它的物理或化學(xué)特點(diǎn),才能判斷并測(cè)定出來(lái)。比如,在質(zhì)譜定性定量分析的時(shí)候,要用到它的分子量。
檢測(cè)樣品中脯氨酸的含量,主要方法包括茚三酮顯色法、水楊酸比色法、苯酰亞胺法、液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法等。
分光光度法:
這種方法是利用化學(xué)試劑和脯氨酸在酸性條件下發(fā)生反應(yīng),生成具有明顯顏色變化的物質(zhì),而且這個(gè)物質(zhì)在一定時(shí)間內(nèi)是穩(wěn)定的,可以被分光光度計(jì)在特定的波長(zhǎng)下測(cè)定,并記錄數(shù)據(jù)。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)⒁来螠y(cè)定對(duì)應(yīng)的吸光度值。根據(jù)吸光度值和濃度之間的關(guān)系,制作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)樣品進(jìn)行處理,并在同樣的條件下測(cè)定吸光度值,重復(fù)幾次,求取平均值。結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的測(cè)定值,可以計(jì)算出樣品中的脯氨酸含量。常用的方法有茚三酮顯色法、水楊酸法、苯酰亞胺法等。
LC-MS法:
LCMS可以測(cè)定樣品中含量較低的脯氨酸,利用了HPLC的高效分離和質(zhì)譜的高靈敏度,對(duì)樣品碎片離子進(jìn)行荷質(zhì)比分析,進(jìn)而對(duì)脯氨酸進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。對(duì)樣品處理,需要利用乙酸酐等試劑對(duì)脯氨酸進(jìn)行衍生化處理。設(shè)置好質(zhì)譜儀的電離源、分析模式、質(zhì)譜分析范圍等條件,調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)參數(shù),分析荷質(zhì)比。