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類(lèi)胡蘿卜素是一類(lèi)天然色素的總稱(chēng),目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的天然類(lèi)胡蘿卜素有700多種,根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)不同可以分為胡蘿卜素和葉黃素。類(lèi)胡蘿卜素廣泛的存在動(dòng)物、高等植物、真菌、藻類(lèi)的色素中,而它的顏色是因?yàn)楣曹楇p鍵的數(shù)目不同而有所變化的,共軛雙鍵越多,顏色就越紅。類(lèi)胡蘿卜素是體內(nèi)維生素A的主要來(lái)源,同時(shí)還具有抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、延緩衰老的作用,在一定程度上能夠保護(hù)視力。
檢測(cè)樣品中的類(lèi)胡蘿卜素含量的方法有多種,主要包括高效液相色譜(HPLC)法、分光光度法、夾心法酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法等。
1. 高效液相色譜法(HPLC)
檢測(cè)出樣品中的類(lèi)胡蘿卜素含量,HPLC是一種經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、高效準(zhǔn)確的方法。它利用了色譜柱的分離功能,流動(dòng)相從色譜柱中將化合物逐步洗脫出來(lái),從而在檢測(cè)器中顯示出色譜圖。根據(jù)色譜峰的峰高或峰面積,可以對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和判斷。使用類(lèi)胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品,梯度稀釋?zhuān)瑴y(cè)定對(duì)應(yīng)的峰面積,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),計(jì)算回歸方程和回收率。在同樣的色譜條件下,對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定,記錄色譜峰信息。同時(shí),根據(jù)回歸方程計(jì)算出樣品中的類(lèi)胡蘿卜素含量。這種方法應(yīng)用范圍廣,比如動(dòng)物、血清、細(xì)胞、植物、細(xì)菌、果蔬、土壤、微生物等樣本。
2.分光光度法
這是一種相對(duì)簡(jiǎn)單的方法,它利用類(lèi)胡蘿卜素在特定波長(zhǎng)下的吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)來(lái)確定樣品中類(lèi)胡蘿卜素的含量。這種方法只能測(cè)量出總胡蘿卜素的含量,準(zhǔn)確性相對(duì)比較低,適合大批量樣本的檢測(cè)。這里需要注意的是,對(duì)樣本進(jìn)行處理。如果樣本處理不準(zhǔn)確,結(jié)果更不準(zhǔn)確了。比如,采用乙醇提取法,通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)⒁钥瞻诪閷?duì)照。
3.酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法
這里采用的是夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法,將待測(cè)的物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)品加入到微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。先將待測(cè)物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再進(jìn)行溫育和洗滌,去除沒(méi)有結(jié)合的酶結(jié)合物。然后,加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用,產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度是呈線(xiàn)性關(guān)系的,通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)诿笜?biāo)儀特定的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。根據(jù)對(duì)應(yīng)的濃度關(guān)系,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),可以計(jì)算出樣品中的類(lèi)胡蘿卜素的含量。
4.液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法
LC-MS集合了液相色譜的分離和質(zhì)譜高分辨的優(yōu)點(diǎn),準(zhǔn)確度更高,能夠同時(shí)實(shí)現(xiàn)類(lèi)胡蘿卜素的定性和定量分析。這種方法,能夠精確測(cè)定和判斷分子結(jié)構(gòu)和含量,但需要有專(zhuān)業(yè)的技術(shù)和設(shè)備來(lái)完成。