土壤中有許多種酶，磷酸酶是一類催化土壤有機磷化合物礦化的酶。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮、有效磷和pH的顯著影響，根據(jù)pH范圍不同，分為堿性磷酸酶、中性磷酸酶和酸性磷酸酶。堿性磷酸酶就是我們今天研究的對象。堿性磷酸酶主要是由微生物分泌，在土壤中促進(jìn)有機磷化合物水解，生成磷酸根離子和自由的羥基，為植物提供必要的營養(yǎng)，促進(jìn)生長發(fā)育。

土壤堿性磷酸酶的測定原理：在堿性環(huán)境下，土壤堿性磷酸酶催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過分光光度法測定酚的生成量，即可計算出土壤堿性磷酸酶活性。

用電子天平精準(zhǔn)稱量5g土壤樣品，放在50mL的容量瓶中，再加入1mL的甲苯，趕緊塞上塞子。容量瓶在手中，帶上塑膠防護(hù)手套，輕輕的搖呀搖，現(xiàn)在都有搖床了，設(shè)置搖晃15min。拿到桌面上，再加入5mL的磷酸苯二鈉和5mL的堿性磷酸酶緩沖液。仔細(xì)搖勻后放入恒溫箱，在37℃下培養(yǎng)24h。之后，加入0.3%硫酸鋁溶液用致密濾紙過濾。取0.25mL濾液于25mL容量瓶中，加1.25mL pＨ9.0硼酸鹽緩沖液，再加入0.75mL 2.5％的鐵氰化鉀和0.75mL 0.5％的4－氨基安替吡啉溶液，搖動，仔細(xì)混勻，這時溶液呈粉紅色，然后加水定容。待顏色穩(wěn)定時（20-30min），在波長510nm處測定各樣品的吸光值。

接著，就要繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。檢測土壤堿性磷酸酶，用的是酚為標(biāo)準(zhǔn)工作液。取7個梯度體積的酚溶液，放置到50ml的容量瓶中，每瓶加入對應(yīng)體積的緩沖液和顯色劑，顯色后稀釋到刻度，30min后等顏色穩(wěn)定了，上分光光度計測定，波長和樣品檢測的波長一樣。這里需要注意的是，用分光光度計檢測，是要有對照的，就用0ml的酚溶液作為對照，其他步驟相同，進(jìn)行測定。以吸光度值為縱坐標(biāo)，以濃度為橫坐標(biāo)，繪制出來標(biāo)準(zhǔn)曲線。

有了標(biāo)準(zhǔn)曲線，就要計算樣品中的堿性磷酸酶活性了。