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生物胺含量檢測(cè)方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-08-02 | 166 次瀏覽 | 分享到:

生物胺是一類具有生物活性,含有氨基的低分子量化合物,主要由微生物氨基酸脫羧酶的作用,當(dāng)氨基酸脫掉羧基就剩下生物胺了。適量的生物胺能夠增強(qiáng)代謝和免疫力,清除自由基;但是,如果過量的攝入就會(huì)引起頭疼、嘔吐等不良生理反應(yīng)。



從結(jié)構(gòu)上來區(qū)分,有脂肪族的腐胺、尸胺、精胺、亞精胺等,有芳香族的酪氨、苯乙胺,也有雜環(huán)族的組胺、色胺等。它們都在生物活性中起著重要的作用,比如調(diào)節(jié)DNA、RNA和蛋白質(zhì)的合成,穩(wěn)定生物膜等方面,都有突出的貢獻(xiàn)。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn),肉類、魚類、豆制品、奶酪、酒類、泡菜、豆瓣醬中都有存在。


檢測(cè)樣本中生物胺含量,方法還是比較多的,比如高效液相色譜(HPLC)法、薄層色譜(TLC)法、電化學(xué)法等,根據(jù)不同的需求來選擇方法。這里,簡(jiǎn)單介紹一下實(shí)驗(yàn)室常用的HPLC方法,僅供參考。



因?yàn)樯锇繁旧淼淖贤馕毡容^低,而且不能發(fā)生熒光,需要對(duì)實(shí)驗(yàn)樣本進(jìn)行柱前或柱后衍生化處理,以提高檢測(cè)靈敏度,比如丹磺酰氯、鄰苯二甲醛等和生物胺反應(yīng),生成具有紫外吸收或熒光特性的衍生物。在此之前,要對(duì)樣品進(jìn)行前處理,用采用三氯乙酸、高氯酸等溶劑進(jìn)行提取,用正己烷去除脂肪,三氯甲烷-正丁醇萃取凈化。


HPLC檢測(cè)生物胺,色譜條件一定要選擇好,才能測(cè)得出來。C18的色譜柱,紫外的檢測(cè)器(254nm),乙腈和水組成的流動(dòng)相(梯度洗脫),流速1.5mL/min,柱溫30℃。進(jìn)樣量根據(jù)實(shí)際情況來選擇,不能太多了,太多的話壓力不穩(wěn)定,出峰也會(huì)有問題。這個(gè)方法可以采用內(nèi)標(biāo)法定量測(cè)定,對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定是要計(jì)算回收率,并根據(jù)色譜圖上的峰面積或峰高計(jì)算出生物胺的含量。


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