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蘿卜硫素含量檢測(cè)方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-08-12 | 309 次瀏覽 | 分享到:

蘿卜硫素主要存在于十字花科植物,如芥藍(lán)、紅蘿卜、白菜、西蘭花等蔬菜中,是常見的抗氧化劑。在植物體內(nèi)是異硫氰酸鹽經(jīng)黑芥子酶的水解而生成的,分子式為C6H11NOS2,沸點(diǎn)368.2 ℃,分子量177.29。常溫下呈黃色或無色液體,不溶于水,很容易溶解到甲醇、乙腈等有機(jī)溶劑中,在高溫和堿性條件下容易分解。當(dāng)植物組織被破壞的時(shí)候,才能水解得到蘿卜硫素。在水解的過程中,容易受到pH、溫度、水分等因素的影響,產(chǎn)量是比較少的。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,蘿卜硫素具有重要的研究價(jià)值。



檢測(cè)樣品中含有蘿卜硫素的方法,包括高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、薄層色譜(TLC)法等。每種方法都有優(yōu)點(diǎn),根據(jù)需求來選擇,應(yīng)用范圍有所不同,這里說一下HPLC的檢測(cè)過程。


高效液相色譜(HPLC)法


HPLC是目前檢測(cè)蘿卜硫素最常見的方法之一,這種方法靈敏度高,準(zhǔn)確度高,適合不同類型的樣品。整個(gè)過程包括樣品處理、儀器和試劑、色譜條件設(shè)置、檢測(cè)和數(shù)據(jù)分析。其中,樣品處理是很關(guān)鍵的。選擇新鮮的蘿卜作為實(shí)驗(yàn)材料,經(jīng)過提取、離心、過濾等步驟獲取目標(biāo)產(chǎn)物待測(cè)液。上面說過,蘿卜硫素對(duì)條件比較敏感,容易受到pH、溫度、水分等因素的影響,因此提取過程要注意,盡可能避免影響。根據(jù)操作說明,去除雜質(zhì),以便于后續(xù)的色譜分析。



準(zhǔn)確檢測(cè),還需要對(duì)HPLC足夠的熟悉,才能將方法運(yùn)用自如。色譜條件的設(shè)置,包括十八烷基(C18)色譜柱,乙醇或乙腈-水(20:80)為流動(dòng)相,流速為1ml/min,檢測(cè)波長為201 nm,紫外檢測(cè)器,柱溫35℃等。這些條件不是絕對(duì)的,而是根據(jù)實(shí)際情況,進(jìn)行最優(yōu)化的設(shè)計(jì)組合,從而獲取理想的色譜峰,便于有效、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)分析。


色譜檢測(cè)的過程,它包括了標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作,樣品檢測(cè),數(shù)據(jù)計(jì)算等過程。要測(cè)定樣品含量,就離不開標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度進(jìn)樣,以獲得色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo),以濃度為橫坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,并計(jì)算回歸方程。同時(shí),要計(jì)算出回收率。以同樣的色譜條件,測(cè)定樣品,在軟件中記錄色譜峰數(shù)據(jù)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的曲線,計(jì)算出樣品中的蘿卜硫素的含量。


另外,還有用到GC和TLC的方法對(duì)樣品中蘿卜硫素進(jìn)行分離、檢測(cè),根據(jù)實(shí)際情況來選擇。


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