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葫蘆素B是從葫蘆科植物中分離出來的一類四環(huán)三萜類化合物,又被稱為葫蘆苦素B。它是葫蘆素家族中含量最為豐富的成員,具有廣泛的藥理特性。葫蘆素B難溶于水,但可以溶于甲醇、乙醇等有機溶劑。除了葫蘆,還有很多植物都富含葫蘆素B,比如瓜蒂、絲瓜、黃瓜等。
檢測植物樣本中的葫蘆素B含量,常用的方法是高效液相色譜(HPLC)法。這并不是唯一的,也可以使用薄層色譜法。HPLC檢測葫蘆素B,包括樣品處理、色譜條件設置、標準曲線、樣品測定、數(shù)據(jù)處理等過程。
樣品處理的過程,比如甜瓜蒂,先切成小片,用溫水浸泡,溶解掉上面的油脂。接著,放入瓶中,加入適量的乙醇,攪拌。加入熱水蒸發(fā),降低穩(wěn)定,使得甜瓜蒂中的有效成分完全溶解。用濾紙過濾,初步得到葫蘆素B的提取液。
色譜條件的設置,是相對比較重要的。檢測色譜圖怎么樣,都要靠這些參數(shù)的組合效果。比如,采用C18的色譜柱(250 mm ×4.6 mm,5.0μm),以乙腈--0.05mol.L-1K2HPO4(40:60)為流動相,在光電二級陣列管(DAD)檢測器,228nm波長下測定。設置柱溫25℃,流速為1.0ml/min。根據(jù)實際的情況,進行調(diào)整。每種設備,甚至實驗條件不同,參數(shù)都會有改變。
標準曲線,要測定樣品的含量,就要通過標準曲線來計算。標準曲線,就是拿標準品,梯度進樣,測定對應的色譜峰。以色譜峰面積為縱坐標,以對應濃度為橫坐標,制作出標準曲線來,并計算回歸方程,回收率。通過精密度、穩(wěn)定性、重復性實驗,驗證HPLC方法的準確性和可靠性。在樣品測定的時候,可以連續(xù)進樣6次并測定峰面積,
數(shù)據(jù)計算,對于后期的數(shù)據(jù)處理,要有判斷依據(jù)。根據(jù)標準曲線的回歸方程,可以計算出樣品中含有的葫蘆素B含量。