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土壤纖維素酶活性測定方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-05-07 | 230 次瀏覽 | 分享到:

纖維素酶是一類降解纖維素生產(chǎn)葡萄糖的酶,它不是單獨(dú)的個(gè)體,而是相互協(xié)同作用的酶系,或叫復(fù)合酶。大致上來說,它主要由外切β-葡聚糖酶、內(nèi)切β-葡聚糖酶、β-葡萄糖苷酶和木聚糖酶等組成。就像一把剪刀一樣,把纖維素分解成寡糖或單糖。纖維素酶分布是比較廣泛的,細(xì)菌、真菌和動物體內(nèi)都能產(chǎn)生纖維素酶。在土壤中也有,土壤中的纖維素酶可以分解土壤中的纖維素,從而轉(zhuǎn)化成有利于植物生長的營養(yǎng)成分,增強(qiáng)土壤的肥力。因此,土壤中纖維素活性的檢測,就具有比較重要的農(nóng)業(yè)價(jià)值。



檢測纖維素酶活性,其實(shí)方法也是比較簡單的。通過纖維素酶作用前后底物的變化,來判斷出來纖維素酶的作用能力強(qiáng)弱。檢測方法包括:蒽酮比色法、3,5-二硝基水楊酸比色法、分光光度法、熒光分析法等。



默認(rèn)土壤中含有纖維素酶,土壤樣品代表纖維素酶樣本。將土壤樣品和纖維素底物混合,在一定的條件下進(jìn)行培養(yǎng),讓土壤中的纖維素酶盡可能的發(fā)揮它的潛力。這個(gè)時(shí)候,就要檢測纖維素底物的變化。怎么測定纖維素底物的變化呢?這就要通過特定的標(biāo)記物,通過標(biāo)記物的顏色變化,再對它進(jìn)行量化處理。通過蒽酮比色法,測定底物所產(chǎn)生的還原糖含量,可以計(jì)算出纖維素酶活力。酶活并不是含量,酶活是它在實(shí)驗(yàn)的條件下的分解能力。纖維素被水解的過程中會產(chǎn)生還原糖,除了蒽酮比色法,還可以用3,5-二硝基水楊酸比色法。底物生成的還原糖可以和3,5-二硝基水楊酸發(fā)生反應(yīng),生成橙色的3-氨基-5-硝基水楊酸,這個(gè)顏色的變化程度就和還原糖量就有了關(guān)系。通過分光光度計(jì)可以測定還原糖含量,在測定的過程中要做空白對照。



在進(jìn)行土壤纖維素酶活性測定時(shí),通常需要考慮土壤樣品的預(yù)處理、反應(yīng)條件的控制、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作以及最終活性單位的計(jì)算等因素。


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