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植物褪黑素含量檢測方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-07-30 | 504 次瀏覽 | 分享到:

褪黑素不僅存在于動物體內,在植物體內也是有發(fā)現的。同一個植物在不同位置上,褪黑素的含量也是不同的。一般來說,繁殖器官和花朵中的褪黑素含量較高。褪黑素有什么用呢?它能夠使植物的種子免受紫外線、低溫等外界因素的侵害。而在合成褪黑素方面,植物和動物差不多。植物中的色氨酸先脫羧生成色胺,再被羧化酶催化,生成5-羥色胺。色胺是吲哚乙酸的前體,可以生成吲哚乙酸。大家都知道,吲哚乙酸就是植物生長素。



檢測植物褪黑素含量的方法還是比較多的,比如高效液相色譜(HPLC)法、氣相色譜(GC)法、紫外分光光度法(UV)、酶聯免疫法(ELISA)等。下面,簡單的介紹一下,需要做實驗的,還要認真參考相關的說明和標準。


1.高效液相色譜(HPLC)法


HPLC是檢測天然物質成分的有效方法之一,它具有高度靈活性、高靈敏性的特點,長期深受科研檢測工作者的青睞。根據物質在固定相和流動相之間的分配系數差異而進行分離,并在對應的檢測器上獲取信號。通過對信號進行模擬,在軟件中記錄色譜峰的峰高和峰面積,并對數據進行處理,計算出樣品中的褪黑素含量。檢測過程包括:樣品提取-凈化處理-色譜條件設置-上機檢測-數據處理。需要注意的是色譜條件,每種物質,甚至不同設備對檢測過程都需要進行調試。比如用C18的色譜柱,紫外檢測器,波長設置,柱溫,流動相,流速和進樣量確定,它們直接決定了出峰的情況。如果峰出的不好,計算出來是有難度,或不能準確反應真實結果。標準曲線和回歸方程,計算回收率,并計算樣品中的褪黑素含量。



2.氣相色譜(GC)法


GC用火焰離子化檢測器來測植物褪黑素含量,以氦氣為載氣,用外標法測定。對植物褪黑素進行檢測,在色譜柱和流動相之間進行分離,通過檢測器來測定數據。為了檢測更準確,獲取更豐富的結構信息,也可以用質譜(MS)作為檢測器。需要注意的是,要對樣品進行衍生化處理,用來提高褪黑素的穩(wěn)定性和揮發(fā)性。



3.紫外分光光度法(UV)


褪黑素在特定波長下具有吸收峰,利用紫外分光光度計測定其吸光度,根據標準曲線,計算出褪黑素含量。這種方法操作簡單,成本也比較低,適合于含量比較高的樣品。如果含量比較低,而且要求比較高,就要考慮用HPLC或GC等方法。


4.酶聯免疫吸附(ELISA)法


這個時候采用競爭法的原理,將褪黑素和非褪黑素的抗原競爭性結合在微孔板上的抗體結合位點,褪黑素抗體結合到抗體上的量和樣品中的抗原的量是呈線性關系的,洗板,去除游離的褪黑素抗體。結合在抗體上的褪黑素能夠和標記物顯色出來,通過標準品梯度稀釋,測定數據,并制作標準曲線。根據標準曲線,計算出樣品中的褪黑素含量。


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