m.gamemusichall.net
鐵離子在細(xì)胞中主要以二價鐵離子(Fe2+)的形式存在的,具有還原性,是血紅蛋白分子的重要組成部分。Fe2+對人體的新陳代謝起著重要的作用,如果Fe2+含量不足,就會造成缺鐵性貧血。鐵離子在動物體內(nèi)主要以蛋白質(zhì)復(fù)合物形式存在,很少以離子的形態(tài)存在。檢測細(xì)胞中的Fe2+含量的方法,主要有原子吸收法和比色法等。
檢測細(xì)胞中的鐵離子含量,這里用的是分光光度法,也是以(亞鐵嗪法)試劑盒的形式進(jìn)行。說的是,在酸性介質(zhì)中,以亞鐵嗪為底物,將和鐵蛋白結(jié)合的血清鐵從蛋白中解離出來,再被還原為Fe2+。Fe2+和亞鐵嗪反應(yīng)生成紫紅色化合物。通過酶標(biāo)儀,在562nm波長處,測定吸光度值。對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行梯度稀釋,并上機(jī)檢測吸光度值,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測定樣品的吸光度值,并計算出樣品中鐵離子的含量。試劑盒的檢測,線性范圍5~300uM。
操作步驟:樣品準(zhǔn)備-標(biāo)準(zhǔn)品稀釋-混合溶液-60℃孵育1h-冷卻離心-加入檢測劑,孵育30min-562nm測定吸光度-繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線-計算樣品鐵離子濃度。
注意事項:試劑盒檢測細(xì)胞鐵離子含量,是不受其他離子的干擾,比如鎂離子、錳離子等。如果測定的樣本濃度高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,需要對樣品進(jìn)行稀釋。